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目錄

第 1 章 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量測定 1

1.1 前言 1

1.2 儀器設備與試劑 2

1.3 實驗方法 3

1.4 實驗結果 4

第 2 章 蜂蜜中羥甲基糠醛含量測定 5

2.1 前言 5

2.2 儀器設備與試劑 5

2.3 實驗方法 6

2.4 實驗結果 7

第 3 章 蜂蜜中咖啡因含量測定 8

3.1 前言 8

3.2 儀器設備與試劑 9

3.3 實驗方法 10

3.4 實驗結果 10

第 4 章 蜂蜜中黃曲霉毒素含量測定 11

4.1 前言 11

4.2 儀器設備與試劑 13

4.3 實驗方法 14

4.4 實驗結果 15

4.5 小結 18

第 5 章 蜂蜜中四環素類抗生素含量測定 19

5.1 前言 19

5.2 儀器設備與試劑 19

5.3 實驗方法 20

5.4 實驗結果 22

第 6 章 蜂蜜中其它獸藥測定 23

6.1 氯霉素 23

6.2 諾氟沙星 24

6.3 強力霉素 24

第 1 章 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量測定

1.1 前言

隨著生活水平的提高，人們的保健意識也越來越強。蜂蜜是一種極好的食品和醫療保健品，是蜜蜂采集周邊蜜源植物的花蜜并貯存在蜂巢中，與自身特殊物質結合，消化而成的天然甜味物質。蜂蜜主要由碳水化合物（約占總量的 3/4）和水分（約占總量的 1/4）組成，此外蜂蜜還含有轉化酶、過氧化氫酶、淀粉酶、脂酶等蛋白質（酶）、有機酸、芳香物質、揮發油、蠟、色素及一些膠狀物等。糖類物質尤其是單糖（葡萄糖和果糖）占碳水化合物的 85%-90%，形成了高糖分的飽和溶液。

隨著蜂蜜銷售的緊俏，一些不法商販開始人為向蜂蜜中添加水、蔗糖、轉化糖、飴糖、羧甲基纖維素、糊精或淀粉類物質以達到以次充好、提高產量的目的。但是假蜂蜜并不具天然蜂蜜的全部營養成分，更不具有天然蜂蜜獨特的保健功能。

為滿足對蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定，依利特公司結合 GB 5009.8-2016《食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定》及《中國藥典》2015 版第一部相關標準，采用示差折光檢測器，經氨基色譜柱分離，根據保留時間定性和峰面積定量，提出了蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量測定的全套 HPLC 解決方案，包括前處理設備、試劑、前處理方法直至液相色譜方法。相關人員可參考本實驗中的方法，進行蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的檢測。

1.2 儀器設備與試劑

實驗過程中其它玻璃器皿還包括容量瓶 (100mL、50mL、25mL、10mL)、樣品瓶 (1.5mL)、移液槍 (0~1000μL，0~5000μL)、移液槍槍頭 (1mL，5mL)、一次性 PVC 手套、一次性口罩、進樣針、濾膜等若干。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制

標準曲線的制備：準確稱 2.5g 果糖、2.0g 葡萄糖標準品（精確至 0.0001g），加適量 40% 乙腈溶液溶解，并定容至 50mL，過濾，作為儲備液；準確稱 1.0g 蔗糖、1.0g 麥芽糖標準品（精確至 0.0001g），加適量 40% 乙腈溶液溶解，并定容至 50mL，過濾，作為儲備液。

按照表 1-4 分別將四種單糖的儲備液配成所需混標濃度（標準曲線濃度）：

1.3.2 樣品前處理

取 2.5g 蜂蜜樣品（精確至 0.0001g），加適量 40% 乙腈溶液溶解，并定容至 50mL，過濾，待測。

1.3.3 色譜條件

• 流動相：乙腈 / 水 = 75/25（V/V）
• 色譜柱：Supersil NH?-S 5μm 4.6×250mm
• 流速：1.0mL/min
• 檢測：RID（示差折光檢測器）
• 進樣體積：20μL
• 柱溫：35℃

1.4 實驗結果

圖 1-1 標準品與樣品典型分離色譜圖

（譜圖含果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖特征峰，標注 “單糖標準品”“椴樹蜂蜜樣品”，橫坐標為保留時間 min）

第 2 章 蜂蜜中羥甲基糠醛含量測定

2.1 前言

蜂蜜中羥甲基糠醛（HMF）含量的多少是決定蜂蜜質量優劣的重要標準，國際貿易中 HMF 屬于強檢指標。HMF 不是蜂蜜中原來就含有的成分，而是后天產生的，當存放時間過長或者加工溫度過高時自然產生。HMF 是黑色、具有難聞氣味的有毒物質，它的存在導致蜂蜜風味和顏色改變，影響口感和外觀；且 HMF 對眼、粘膜或皮膚有刺激性，食之過多會引起中毒。因此蜂蜜中羥甲基糠醛含量的測定非常重要。

圖 2-1 羥甲基糠醛結構式（化學結構表達式略）

為滿足對蜂蜜中羥甲基糠醛含量的測定，依利特公司結合 GB 18932.18-2003《蜂蜜中羥甲基糠醛含量的測定方法》及《中國藥典》2015 版第一部相關標準，采用高效液相色譜 - 紫外檢測法，經反相色譜柱分離，根據保留時間定性和峰面積定量，提出了蜂蜜中羥甲基糠醛含量測定的全套 HPLC 解決方案。相關人員可參考本實驗中的方法，進行蜂蜜中羥甲基糠醛含量的檢測。

2.2 儀器設備與試劑

2.3 實驗方法

2.3.1 標準溶液配制

• 標準儲備溶液：準確稱取適量羥甲基糠醛標準物質于 100mL 容量瓶中，加約 10mL 甲醇溶解，用水稀釋至刻度，配成 0.20mg/mL 的標準儲備液。
• 標準工作溶液：分別吸取適量標準儲備液至 100mL 容量瓶中，用 10% 甲醇溶液稀釋至刻度，配成 0.10μg/mL、0.20μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、10μg/mL 的標準工作溶液，當天新鮮配制。

2.3.2 樣品前處理

稱取 10g 試樣（精確至 0.01g），置于 100mL 燒杯中，加入 10mL 甲醇，用玻璃棒輕輕攪拌均勻，使試樣完全溶解；轉移至 100mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，充分混勻，過濾，待測。

2.3.3 色譜條件

• 流動相：甲醇 / 水 = 10/90（V/V）
• 色譜柱：Supersil ODS2 5μm 4.6×250mm
• 流速：1.0mL/min
• 檢測波長：285nm
• 進樣體積：10μL
• 柱溫：30℃

2.4 實驗結果

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高清資料：所有章節譜圖（圖 1-1 至圖 6-3）高清版（含峰形放大細節、基線噪聲標注）、實際蜂蜜樣品（椴樹蜜、市售蜂蜜）檢測原始譜圖；

操作指南：免疫親和柱凈化 / 固相萃取操作視頻、光化學衍生器安裝與維護教程、樣品前處理（高速攪拌、氮吹濃縮）實操演示；

拓展數據：各檢測項目（糖類、HMF、咖啡因等）的加標回收率報告（85%-106%）、方法精密度驗證數據（RSD＜2%）、不同蜂蜜基質（椴樹蜜、洋槐蜜）檢測對比表；

附錄文件：GB 5009.8-2016、GB 5009.22-2016 等標準原文節選、儀器操作安全規范、耗材訂貨清單（色譜柱、試劑、濾膜型號編碼）。

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技術咨詢：400-66-35483