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前言

維生素 D（簡稱 VD）是一種脂溶性維生素，主要的成分是維生素 D3與 D2。前者由人皮下的 7-脫氫膽固醇經紫外線照射而成；后者由植物或酵母中含有的麥角固醇經紫外線照射而成。維生素 D 的主要功用是促進小腸粘膜細胞對鈣和磷的吸收，腸中鈣離子吸收需要一種鈣結合蛋白，1，25-二羥基維生素 D3可誘導此蛋白合成，促進 Ca2+吸收，又可促進鈣鹽的更新及新骨生成，也促進磷吸收與腎小管細胞對鈣、磷的重吸收，故可提高血鈣、血磷濃度，有利于新骨生成和鈣化。

維生素 D 還有促進皮膚細胞生長、分化及調節免疫功能作用。一般成年人經常接觸日光不致發生缺乏病，嬰幼兒、孕婦、乳母及不常到戶外活動的老人要增加維生素 D 供給量到每日 10μg（相當于 400 國際單位）。缺乏維生素 D 兒童可患佝僂病，成人患骨質軟化癥。

二維液相色譜

二維液相色譜是將分離機理不同而又相互獨立的兩支色譜柱組合，加強分離能力的聯用技術。二維液相色譜系統通常由第一維分離柱和第二維分離柱串聯而成，兩柱之間以閥切換作為接口，通過流動相流路的改變，將部分或全部第一維柱流出的組分，導入第二維進行二次分離，從而起到凈化目標化合物，提高系統分離能力的作用。在一維分離系統中不能完全分離的組分，可能在二維系統中得到更好的分離，分離能力、分辨率可得到極大的提高。二維液相色譜可應用于制藥、生物制藥、天然產物的研究和食品分析等領域中復雜樣品的分離分析，有著廣闊的應用前景。

本次依利特公司根據《GB 5009.296-2023 食品安全國家標準 食品中維生素 D 的測定》，用在線柱切換-反相液相色譜法（二維液相色譜法），提出了測定維生素 D 的解決方案，供大家參考使用。

2、實驗方法

2.1 樣品溶液配制

1. 維生素D_2標準儲備溶液 1mg/mL：準確稱取 50mg 維生素D_2標準品于燒杯中，用甲醇溶解并轉移至 50mL 容量瓶中，定容至刻度，混勻。
2. 維生素D_3標準儲備溶液 1mg/mL：準確稱取 50mg 維生素D_3標準品于燒杯中，用甲醇溶解并轉移至 50mL 容量瓶中，定容至刻度，混勻。
3. 維生素D_2、D_3混合標準溶液 50μg/mL：分別吸取維生素D_2標準儲備溶液 1mg/mL、維生素D_3標準儲備溶液 1mg/mL 各 5.00mL 于 100mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻。

2.2 色譜條件

• 色譜柱：一維色譜柱：Supersil C8 3μm，120?，ID4.6×150mm二維色譜柱：SinoPak C18 3μm，120?，ID4.6×150mm富集柱：Supersil ODS2 5μm，300?，ID4.6×10mm
• 檢測波長：264nm
• 柱溫：室溫

一維系統

• 流量：1.0 mL/min
• 進樣體積：100μL
• 流動相組成 (V/V)：A: 水；B: 乙腈 / 甲醇 = 3/1
• 梯度表：

二維系統

流量：1.0 mL/min

流動相組成 (V/V)：乙腈 / 水 = 95/5；甲醇 = 95/5（原文表述修正：應為 “乙腈 / 水 = 95/5”，推測為筆誤）

3、實驗結果

3.1 實驗譜圖

3.2 重復性

以 Kromstation 色譜數據工作站搭配 EClassical 3200L 在線柱切換（二維液相）系統，連續進樣 7 針，重復性譜圖及數據如下：

根據以上實驗數據，Kromstation 色譜數據工作站可以實現對 EClassical 3200L 二維系統的全反控。根據 GB 5009.296-2023《食品安全國家標準 食品中維生素 D 的測定》第二法：在線柱切換 - 反相液相色譜法（二維液相色譜法）分離維生素D_2、D_3，Kromstation 色譜數據工作站可以自動實現二維系統的閥切換完成維生素D_2、D_3的分離，且實驗結果具有良好的重復性和分離度，滿足對維生素 D 同分異構體的分離檢測需求。

完整方案（PDF 版）下載提示

上述內容為《維生素 D 二維色譜系統分析檢測解決方案》全文原樣呈現，完整 PDF 文檔額外包含以下核心資源，點擊鏈接即可獲取：

1. 高清資料：所有實驗譜圖（圖 1 - 圖 3）高清版（含峰形放大細節、基線噪聲標注）、二維系統閥切換流路示意圖、儀器硬件連接實物圖；
2. 操作指南：在線柱切換系統搭建教程、Kromstation 工作站閥切換程序設置視頻、色譜柱活化與維護細則；
3. 拓展數據：維生素D_2、D_3線性方程（R2≥0.999）、方法檢出限 / 定量限報告（LOD≤0.05μg/mL）、加標回收率數據（90%-105%）；
4. 附錄文件：GB 5009.296-2023 標準原文節選、儀器操作安全規范、耗材訂貨清單（色譜柱、試劑、濾膜型號編碼）。

下載通道

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