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1 前言

培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有水、氮源、無機鹽（包括微量元素）、碳源、生長因子（維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。其中培養基中氨基酸的檢測受到廣泛關注，本解決方案參考標準 “YY/T 1695-2020 人類輔助生殖技術用醫療器械培養用液中氨基酸檢測方法” 中的氨基酸分析方法和標準 “GB5009.28-2016 食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定” 中的蛋白沉淀方法，給出了培養基樣品預處理和 HPLC 在線分析測試方法。

依利特使用新推出的 EClassical 3200 液相色譜儀和經典的 Supersil AQ-C18 色譜柱，為培養基中氨基酸檢測提出了分析檢測解決方案，供相關人員參考使用。

2 儀器設備與試劑

3 樣品中的氨基酸含量檢測

3.1 樣品制備

3.1.1 樣品蛋白沉淀

稱 2 g 樣品于 50 mL 容量瓶中，加入 25 mL 水，超聲溶解后加入蛋白沉淀劑（亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液各 2 mL），混勻后用離心機 8000 r/min 離心 5 min，清液轉移至 50 mL 容量瓶中。于殘渣內加入 20 mL 水，混勻后超聲 5 min，用離心機 8000 r/min 離心 5 min，清液轉移至之前的 50 mL 容量瓶中，加水定容至刻度。

3.1.2 樣品衍生

精密量取對照品溶液 50 μL，置于 5 mL 塑料離心管中，精密加入 0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液（pH 10.2）250 μL，混勻，精密加鄰苯二甲醛溶液 50 μL，混勻，放置 30 s，精密加入芴代甲氧基酰氯溶液 50 μL，混勻，放置 30 s，精密加稀釋劑 400 μL。

3.2 標準品制備

市售 18 種氨基酸標準溶液，其衍生方式同樣品衍生方法。

3.3 溶液配置

1. 流動相 A：稱取十二水合磷酸氫二鈉 4.5 g，十水合四硼酸鈉 4.75 g，加水 1000 mL，用鹽酸調 pH 至 8.2。
2. 流動相 B：取甲醇 450 mL，乙腈 450 mL，水 100 mL，混勻。
3. 0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液（pH 10.2）：取硼酸 24.73 g，加水 800 mL 溶解，用 40% 氫氧化鈉溶液調 pH 至 10.2，然后加水稀釋至 1000 mL。
4. 鄰苯二甲醛溶液：取鄰苯二甲醛 80 mg，乙酰半胱氨酸 97 mg，加 0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液（pH 10.2）7 mL，加乙腈 1 mL 溶解。
5. 芴代甲氧基酰氯溶液：取芴代甲氧基酰氯 40 mg，加乙腈 8 mL 溶解。
6. 稀釋液：取流動相 A 100 mL，加磷酸 0.5 mL，混勻。
7. 0.1 mol/L 鹽酸溶液：取鹽酸 9 mL，加水適量使成 1000 mL，搖勻。
8. 0.1 mol/L 氫氧化鈉溶液：稱取 4 g 氫氧化鈉，加新沸過的冷水使成 1000 mL，搖勻。

3.4 色譜條件

流動相梯度

• 色譜柱：Supersil AQ-C18 5 μm 4.6×150 mm
• 檢測波長：338 nm（0-31 min，一級氨基酸）；262 nm（31-40 min，二級氨基酸）
• 進樣體積：40 μL
• 柱溫：50 ℃

4 18 種氨基酸混標測試（實驗）結果

18 種氨基酸分析譜圖

5 結論

本實驗參考標準 “YY/T 1695-2020 人類輔助生殖技術用醫療器械培養用液中氨基酸檢測方法” 中的氨基酸分析方法和標準 “GB5009.28-2016 食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定” 中的蛋白沉淀方法，對培養基中氨基酸成分進行分析檢測。測試結果數據符合標準要求，結果表明：該系統穩定性良好，定量結果準確。

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操作指南：蛋白沉淀分步操作視頻、柱前衍生反應實操演示、色譜柱活化與維護教程；

拓展數據：18 種氨基酸線性方程（R2≥0.999）、檢出限 / 定量限報告、加標回收率數據（88%-95%）、精密度驗證結果（RSD＜2%）；

附錄文件：YY/T 1695-2020、GB5009.28-2016 標準原文節選、儀器操作安全規范、耗材訂貨清單（色譜柱、試劑、濾膜型號編碼）。

下載通道

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