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維生素D（VD）是維持人體鈣磷代謝平衡的關鍵營養素，其缺乏可導致兒童佝僂病和成人骨質軟化癥。食品中VD主要以VD2（麥角鈣化醇）和VD3（膽鈣化醇）形式存在，兩者結構高度相似（僅側鏈雙鍵位置不同），傳統HPLC（一維）難以實現完全分離，易導致定量誤差。本文基于EClassical 3200 HPLC/3200L UHPLC構建二維液相色譜系統（2D-LC），結合GB 5009.296-2023《食品安全國家標準 食品中維生素D的測定》（第二法）要求，實現對食品中VD2和VD3的高效、精準檢測。

2D-LC，突破傳統HPLC（一維）分離瓶頸

與傳統HPLC的對比

工作流程

測定維生素D的2D-LC流程如下圖所示。利用KromStation色譜工作站實現系統自動化分析。

流程說明：

① 除雜質：樣品進入一維柱，非目標組分排至廢液

② 富集：閥切換至富集柱，捕獲目標VD組分。

③ 分析：目標組分轉移至二維柱，實現VD2/VD3分離。

方法優勢

在線凈化：一維柱可充當凈化柱，去除蛋白質和脂質，替代繁瑣的液液萃取/固相萃取。

中心切割技術：精準轉移目標窗口（20.2–21.5 min），避免非目標組分干擾。

自動化分析：KromStation色譜工作站控制下，通過切換閥自動完成富集、轉移與分離，減少人為誤差。

色譜條件

方法性能驗證

分離效果

2D-LC的一維中僅出現一個VD峰，表明VD2 與VD3并沒有被分開；而在二維中，VD2和VD3的色譜峰有著良好的基線分離。

VD一維色譜圖

VD二維色譜圖（兩個色譜峰分別為VD2 與VD3）

方法精密度（n=7）

與國標 GB 5009.296-2023的符合性分析

GB 5009.296-2023 第二法“在線柱切換-二維液相色譜法”明確要求：

_{1、需采用二維色譜系統實現VD2與VD3的分離，分離度≥1.5。}

2、方法精密度（RSD）應≤5%。

3、需具備在線凈化與富集功能，減少前處理誤差。

依利特方案完全滿足上述要求。

1、分離度（1.809~2.121）優于國標閾值，確保定性準確性。

2、保留時間與峰面積 RSD 均低于國標限值，重復性穩定。

3、在線閥切換與富集功能符合標準中“自動化凈化”要求，與國標規定的技術路線一致。

結論

_{依利特二維液相色譜系統成功解決了食品基質中VD2/VD3同分異構體的分離難題。該方案在嬰幼兒配方食品、乳制品等VD強化食品檢測中具有重要應用價值，為食品安全監管提供可靠技術支撐。}

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