作者:依利特 來源:未知 2025-08-21
維生素D(VD)是維持人體鈣磷代謝平衡的關鍵營養素,其缺乏可導致兒童佝僂病和成人骨質軟化癥。食品中VD主要以VD2(麥角鈣化醇)和VD3(膽鈣化醇)形式存在,兩者結構高度相似(僅側鏈雙鍵位置不同),傳統HPLC(一維)難以實現完全分離,易導致定量誤差。本文基于EClassical 3200 HPLC/3200L UHPLC構建二維液相色譜系統(2D-LC),結合GB 5009.296-2023《食品安全國家標準 食品中維生素D的測定》(第二法)要求,實現對食品中VD2和VD3的高效、精準檢測。
2D-LC,突破傳統HPLC(一維)分離瓶頸
與傳統HPLC的對比
工作流程
測定維生素D的2D-LC流程如下圖所示。利用KromStation色譜工作站實現系統自動化分析。
流程說明:
① 除雜質:樣品進入一維柱,非目標組分排至廢液
② 富集:閥切換至富集柱,捕獲目標VD組分。
③ 分析:目標組分轉移至二維柱,實現VD2/VD3分離。
方法優勢
在線凈化:一維柱可充當凈化柱,去除蛋白質和脂質,替代繁瑣的液液萃取/固相萃取。
中心切割技術:精準轉移目標窗口(20.2–21.5 min),避免非目標組分干擾。
自動化分析:KromStation色譜工作站控制下,通過切換閥自動完成富集、轉移與分離,減少人為誤差。
色譜條件
方法性能驗證
分離效果
2D-LC的一維中僅出現一個VD峰,表明VD2 與VD3并沒有被分開;而在二維中,VD2和VD3的色譜峰有著良好的基線分離。
VD一維色譜圖
VD二維色譜圖(兩個色譜峰分別為VD2 與VD3)
方法精密度(n=7)
與國標 GB 5009.296-2023的符合性分析
GB 5009.296-2023 第二法“在線柱切換-二維液相色譜法”明確要求:
1、需采用二維色譜系統實現VD2與VD3的分離,分離度≥1.5。
2、方法精密度(RSD)應≤5%。
3、需具備在線凈化與富集功能,減少前處理誤差。
依利特方案完全滿足上述要求。
1、分離度(1.809~2.121)優于國標閾值,確保定性準確性。
2、保留時間與峰面積 RSD 均低于國標限值,重復性穩定。
3、在線閥切換與富集功能符合標準中“自動化凈化”要求,與國標規定的技術路線一致。
結論
依利特二維液相色譜系統成功解決了食品基質中VD2/VD3同分異構體的分離難題。該方案在嬰幼兒配方食品、乳制品等VD強化食品檢測中具有重要應用價值,為食品安全監管提供可靠技術支撐。